Microbiologia: En els anys 1920 hi hagué una recerca activa sobre l’ús de virus que infecten bacteris (virus bacteriòfags) per al tractament d’infeccions bacterianes. En l’era dels antibiòtics aquest interès davallà. L’augment de la resistència a agents antimicrobians ha alterat recentment aquest panorama. El bacteri Staphylococcus aureus resistent a la meticil·lina (MRSA) és un exemple de microorganisme patogen que mostra una extensa resistència a antibiòtics. El grup de recerca de Dezső Péter Virok ha investigat com l’exposició a bacteriòfags afecta el genoma, proteoma i susceptibilitat a antibiòtic d’un isolat clínic de MRSA. Ho expliquen en un article publicat ahir a la revista Antibiotics amb Otília Vágó com a primera autora. L’isolat MRSA era exposat al còctel de bacteriòfags PYOFAG. Vágó et al. comparaven petites colònies variants dels bacteris supervivents amb la soca mare amb tests fenotípics, seqüenciació genòmica, proteòmica comparada i microscòpia electrònica de transmissió. L’exposició als fags induïa canvis profunds en el creixement i la morfologia colonial i augmentava la susceptibilitat a antibiòtics (especialment, beta-lactàmics i aminoglucòsids). Genòmicament apareixien mutacions múltiples, la pèrdua de dues regions genòmiques, i canvis en el gen tarS. Proteòmicament hi havia canvis en vies metabòliques, de resposta a estrès i d’embolcall cel·lular. Les electromicrografies indicaven una reducció en el gruix de la paret cel·lular. L’exposició a fags, doncs, indueix una adaptació fenotípica i molecular en MRSA que acaben per promoure la susceptibilitat a agents antimicrobians.

Vágo et al. han estudiat com l’exposició a un bacteriòfag condueix a una remodelació genòmica i proteòmica d’una soca de ‘Staphylococcus aureus’ resistent a la meticil·lina, alterant-hi aquesta resistència.
MRSA en infeccions nosocomials
MRSA és un dels principals microorganisme responsables d’infeccions nosocomials (HA-MRSA) i comunitàries (CA-MRSA). El tractament és complex perquè MRSA és resistent a antibiòtics convencionals. Això es deu al gen mecA, que codifica una proteïna d’unió a penicil·lina (PBP2a). Altres factors fan que MRSA sigui sovint també resistent a macròlids, clindamicina o fluoroquinolones.
Els bacteriòfags són virus que infecten i lisen cèl·lules bacterianes a través de receptors específics. Aquesta especificitat els distingeix de l’acció dels antibiòtics. Hom ha descrit bacteriòfags capaços de lisar MRSA, d’atacar els seus biofilms i de reduir la severitat de les infeccions. La idea és combinar la teràpia amb bacteriòfags amb antibiòtics.
La sinèrgia fag-antibiòtic (PAS) s’ha observat en enterobacteris. En MRSA s’ha constatat amb antibiòtics com la daptomicina o la ceftarolina.
PYOFAG indueix canvis en la morfologia colonial de MRSAUS14
Vágó et al. incubaren 3,2 milions de cèl·lules de S. aureus en 80 μL, exposant-les a 20 μL d’un còctel comercial de fags, PYOFAG. Els experiments els feien amb controls sense exposició, i a diferents temps d’incubació (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 i 24 hores). La soca utilitzada de S. aureus és MRSAUS14.
En les primeres sis hores el còctel de fags no altera el creixement bacterià (mesurat per densitat òptica). Però a partir de llavors els fags provoquen una lisi bacteriana que es fa gairebé completa al cap de 24 hores.
Les colònies MRSAUS14 són grans i groguenques cultivades en agar sang. En canvi, les colònies MRSAUS14 després del tractament amb PYOFAG solen ser més petites. Això podria explicar-se per la pressió selectiva dels fags, que afavoriria la supervivència de subpoblacions de creixement més lent.
PYOFAG atenua la resistència antimicrobiana de MRSAUS14
Les colònies petites de MRSAUS14 post-PYOFAG tenen un perfil de susceptibilitat a antibiòtics més accentuat que les colònies originals de MRSAUS14. Els antibiogrames ho mostren especialment per a antibiòtics beta-lactàmics i aminoglucòsids.
PYOFAG indueix canvis genòmics en MRSAUS14
Vágó et al. feren seqüenciació genòmica de colònies originals de MRSAUS14 i de colònies petites de MRSAUS14 post-PYOFAG. Com és lògic la identitat dels dos genomes és alta (99,29%). La diferència es manifesta en delecions de dues regions:
- Contig 13, de 14114 bp, i que abasta 15 gens.
- Contig 24.
L’anàlisi de variants mostra 197 mutacions: 156 de canvi de nucleòtid (SNPs), 37 de més d’un nucleòtid (MNPs) i 4 insercions/delecions. 55 mutacions eren intergèniques. El nombre de gens afectats era de 28.
PYOFAG indueix canvis proteòmics en MRSAUS14
Vágó et al. estudien l’expressió global de proteïnes amb LC-MS/MS. La comparació de l’exposició amb PYOFAG amb el control revela una remodelació del proteoma, amb 177 proteïnes sobreregulades i 299 proteïnes inhibides.
PYOFAG indueix una reducció del gruix de paret cel·lular de MRSAUS14
La microscòpia electrònica de transmissió indica que l’exposició amb PYOFAG condueix a unes parets cel·lulars una mica més fines (de 30 nm a 25 nm).
El doble efecte del còctel de bacteriòfags
PYOFAG és un còctel comercial de bacteriòfags que infecten Staphylococcus aureus. Vágó et al. han comprovat in vitro que el còctel té un efecte marcat sobre el creixement de MRSAUS14. Al cap de 6 hores, els bacteriòfags comencen a interferir en el creixement bacterià i la lisi acaba per eliminar la immensa majoria de bacteris.
El més interessant, però, és que els bacteris que aconsegueix sobreviure a PYOFAG tenen unes característiques diferents a la soca originària.
La composició de PYOFAG és un secret comercial, però Vágó et al. han pogut identificar la presència del fag Rosenblumvirus SCH1. En qualsevol cas, a l’efecte bacteriolític directe, cal sumar la inducció de canvis moleculars i fenotípics en els bacteris supervivents. Les subpoblacions supervivents són de creixement més lent, amb un metabolisme reprimit. Si bé aquestes subpoblacions tenen la capacitat de persistir a un atac amb bacteriòfags, són alhora més susceptibles a antibiòtics.
Val a dir que el creixement més lent, traduït en la formació de colònies més petites en agar sang, és una resposta habitual a situació d’estrès (estrès oxidatiu, acidificació, limitació de nutrients, etc.). El fenotip de colònies petites s’associa a bacteris més persistents.
Entre els bacteris supervivents, un 1,3% eren infectades per bacteriòfags. Els bacteris supervivents són genèticament heterogenis. Vágó et al. pensen que són el producte d’una selecció de subpoblacions resistents a la infecció o que han adquirit aquesta resistència durant l’exposició. Els resultats de Vágó et al. ens fan veure que molt probablement MRSAUS14, una soca d’origen clínic força utilitzada en recerca, és genèticament heterogènia.
Un dels canvis gènics detectats per Vágó et al. afecta la proteïna TarS, possiblement implicada en l’absorció de bacteriòfags. Aquest canvi provoca una alteració en la glicosilació de l’àcid teïcoic de la paret bacteriana, que si bé protegeix la cèl·lula de la infecció amb bacteriòfags, la fa més susceptible a antibiòtics beta-lactàmics.
Tot plegat a ajuda a entendre millor el mecanisme subjacent a la sinèrgia entre bacteriòfags i antibiòtics. La fagoteràpia és entesa com més va més com un complement als antibiòtics, i ja no tant com una mera alternativa.
Lligams:
- Bacteriophage Challenge Drives Genomic and Proteomic Remodeling and Alters Antibiotic Resistance in a Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Otília Vágó, Krisztián Laczi, László Orosz, Georgina Horváth, Károly Péter Sárvári, Diána Szabó, Regina Csordás, Zoltán Szabó, Caleb Ardizzone, Titanilla Szögi, Katalin Burián, Dezső Péter Virok. Antibiotics (2026).








